劲骨胶囊鉴别及加水10mL溶解
④薄层色谱法
取胶囊内容物50mg于分液漏斗中,劲骨胶囊鉴别及加水10mL溶解,功效加石油醚(30~600C)20mL,成分振摇,盐酸静置分层,氨基取下层液过滤,葡萄作为样品溶液;取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg,糖含加水5mL溶解,量测作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物50mg,劲骨胶囊鉴别及与样品同法制成阴性样品溶液。功效
取上述3种溶液各3~5μL,成分分别点于同一硅胶G薄板上,盐酸以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水=(4:1:1:2,氨基V:V:V:V)为展开剂(按展开剂体积1mL加入1mg茚三酮,葡萄混匀),糖含展开,取出,晾干,600C烘箱加热10min,至斑点显色清晰,在日光灯下检视。
(2)白芍提取物鉴别
取胶囊内容物2g,加乙醇40mL,超声提取20min,过滤,滤液水浴蒸干,残渣加水20mL溶解,加水饱和正丁醇溶液振摇提取2次,每次20mL,合并正丁醇液,蒸干,残渣加乙醇1mL溶解,作为样品溶液;取白芍对照提取物1g,加乙醇30mL,与样品同法制成对照提取物溶液;取白芍对照药材0.5g,加乙醇10mL,与样品同法制成对照药材溶液;取芍药苷对照品适量,加乙醇制成1mg/mL溶液,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含白芍及白芍提取物胶囊内容物2g,与样品同法制成阴性样品溶液。
取上述5种溶液各5~10μL分别点于同一硅胶G薄板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2,V:V:V:V)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%(g/mL)香草醛硫酸溶液,650C烘箱加热10min,至斑点显色清晰,在日光灯下检视。
(3)碳酸钙鉴别
①稀盐酸反应法
取胶囊内容物0.2g,于10mL试管中,作为样品;取对照品碳酸钙0.1g,于10mL试管中,作为对照品;按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物0.2g,与样品同法制成阴性样品。在上述3支试管中分别滴入稀盐酸试液,观察反应。
②草酸铵试液沉淀法
取胶囊内容物2.5g,于坩埚中先炭化,转入6000C高温马弗炉中炽灼3~4h,残渣加15mL稀盐酸试液溶解,过滤至50mL具塞试管中,加1滴甲基红试液,用氨试液调至黄色,再加数滴稀盐酸试液使呈酸性,作为样品溶液;取碳酸钙对照品0.6g于50mL具塞试管中,加15mL稀盐酸试液溶解,与样品同法制成对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含碳酸钙胶囊内容物2.5g,与样品同法制成阴性样品溶液。
在上述3支试管中分别滴加草酸铵试液,观察反应现象和颜色(稀盐酸、甲基红、氨试液、草酸铵试液参考中国药典四部配制)。
(4)维生素K1鉴别
取胶囊内容物2g,于三角瓶中,加0.03mol/L盐酸溶液5mL,600C超声提取10min,加无水乙醇30mL,继续超声20min,取出,放至室温,转移至50mL容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,摇匀,作为样品溶液;取维生素K1对照品适量,加无水乙醇溶解,制成2μg/mL,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含维生素K1胶囊内容物2g与样品同法制成阴性样品溶液。
将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇100%;检测波长248nm;柱温300C;进样量10μL。
(5)维生素D3鉴别
取胶囊内容物5g,于具塞试管中,加0.02%(mL/mL)氨水溶液10mL和无水乙醇25mL,60℃超声提取10min,取出,放至室温,吸取正己烷10mL于试管中,摇匀,倒入离心管中,3000r/min离心10min,取上层正己烷作为样品溶液;取维生素D3对照品适量,加正己烷溶解,制成0.8μg/mL,作为对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含维生素D3胶囊内容物5g,与样品同法制成阴性样品溶液。
将上述3种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱:硅胶柱(3.9mm×150mm,5μm);流动相:正己烷-环己烷-异丙醇(50:50:0.8,V:V:V);检测波长265nm:柱温:30℃;进样量:20μL。
(6)盐酸氨基葡萄糖含量测定
精密称取胶囊内容物20mg,于三角瓶中,先加1mL乙腈使样品湿润分散,再加适量水超声提取5min,取出,放至室温,转移至25mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,作为样品溶液;精密称取盐酸氨基葡萄糖对照品10mg,于25mL容量瓶中,先加1mL乙腈湿润分散,用水定容至刻度,摇匀,制成400μg/mL对照品溶液。
将上述2种溶液用0.22μm滤膜过滤,采用高效液相色谱仪测定。
色谱柱:C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%(mL/mL)磷酸(三乙胺调至pH3.0)(4:96,V:V);检测波长:95nm;柱温30℃;进样量:10μL。
方法学验证:参照中国药典四部药品质量标准分析方法验证指导原则进行。
三、结果与分析
1、鉴别盐酸氨基葡萄糖
(1)碱性酒石酸铜反应法
取胶囊内容物200mg,于10mL试管中,加水5mL溶解,作为样品溶液;取盐酸氨基葡萄糖对照品0.1mg,与样品同法制成对照品溶液;按样品配方和工艺制成不含盐酸氨基葡萄糖胶囊内容物200mg,与样品同法制成阴性样品溶液的方法实验后观察,样品和对照品溶液生成红色Cu2O沉淀,阴性样品溶液则无此反应,如图2所示。化学反应式如下:C6H12O6+2Cu2++4OH-=C6H12O7+Cu2O↓(红色)+2H2O。
(2)硝酸银反应法
制法与碱性酒石酸铜反应法相同,在水溶解的3支试管中,加入数滴稀硝酸试液,使呈酸性,滴加硝酸银试液,观察反应颜色,样品和对照品溶液生成白色絮状AgCl沉淀,阴性样品溶液则无此反应,如图3所示。化学反应式如下:HCl+AgNO3=AgCl↓(白色)+HNO3。
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相关链接:石油醚,盐酸氨基葡萄糖,冰醋酸,稀盐酸,硝酸银
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